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首頁 > 抗體/蛋白 > 輔助試劑、試劑盒

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產(chǎn)品名稱： 堿性磷酸酶-抗體快速標(biāo)記試劑盒
產(chǎn)品貨號： ARL0600k-1
貨期： 現(xiàn)貨
價格與訂購： 3880
數(shù)量：

庫存： 10
規(guī)格： 200T 2000T

產(chǎn)品信息
如何訂購

產(chǎn)品介紹

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下簡稱AP)分子量140,000Da,在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)研究中的主要應(yīng)用是從DNA中去除5'-磷酸基團(tuán)或作為免疫分析（如ELISA）的報告系統(tǒng)。在免疫分析測試中，酶通常與特定的一級或二級抗體結(jié)合，其活性用顯色（或發(fā)光）底物檢測。

本試劑盒可以幫助實(shí)驗(yàn)者快速實(shí)現(xiàn)AP與抗體的偶聯(lián)。

基本原理

本試劑盒利用抗體和AP上游離的伯氨基（-NH2），采用定向?qū)优悸?lián)技術(shù)將抗體分子與AP共價偶聯(lián)，主要特點(diǎn)：

1、試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進(jìn)行便可得到高品質(zhì)AP偶聯(lián)抗體；

2、本試劑盒所配置的AP為高純度，高活性酶，催化發(fā)光/顯色效率更高；

3、本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù)，AP酶和抗體都不會發(fā)生自連，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；

試劑盒已經(jīng)提供材料

試劑盒規(guī)格	20X3T	200X1T	200X3T	2000X1T
可標(biāo)抗體量	30∽60ug	100∽200ug	300∽600ug	1∽2mg
可標(biāo)抗體次數(shù)	3	1	3	1
組分名稱	各組分配置數(shù)量
活化AP凍干粉	50ugX3	500ug	500ugX3	5mg
標(biāo)記緩沖液	30ml	30ml	30ml	30ml
抗體修飾試劑	30ul*1	30ul*1	30ul*1	30ul*1
30KMWCO超濾管	3支	1支	3支	1支
封閉試劑	50ug*3支	50ug*1支	50ug*3支	50ug*1支
DMSO溶劑	200ul	200ul	200ul	200ul
說明書	1份

其他需要自備試劑材料

待標(biāo)記的生物分子；

移液器及吸頭；

去離子水。

試劑盒儲存

試劑盒抗體修飾試劑放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個月以上。

試劑盒操作流程

1.抗體的修飾

1）取待標(biāo)記抗體（純度>90%），濃度調(diào)整到 5mg/ml左右為宜，按照每mg抗體加入

2μl 抗體修飾試劑溶液，輕輕混勻，在室溫下避光攪拌反應(yīng) 90分鐘；【如果抗體量太少，抗體修飾試劑溶液加入量不少于0.5ul】

2）反應(yīng)完畢后，將其轉(zhuǎn)入30KMWCO超濾管，用標(biāo)記緩沖液超濾3-5次（每次12000rpm 5min），每次管芯內(nèi)液體體積不超過原體積1/4為宜，最后一次超濾完成，管芯內(nèi)液體即為修飾的抗體。

2.活化AP與抗體偶聯(lián)

1）用標(biāo)記緩沖液復(fù)溶活化AP凍干粉，得到活化AP溶液，濃度調(diào)整為5mg/ml（如，按50ug活化AP凍干粉加入10ul標(biāo)記緩沖液復(fù)溶）；

2）將修飾抗體與活化AP溶液，按照質(zhì)量比1:2.5比例（每mg修飾抗體對應(yīng)2.5mg活化AP溶液,50ug 活化AP可以標(biāo)記20ug抗體）混合，室溫避光反應(yīng)2小時；

3）將封閉試劑管中加入5ul DMSO,配置成10mg/ml封閉試劑溶液；按照每0.5mg抗體5ul的體積比例加入上述步驟2）反應(yīng)產(chǎn)物中，封閉未反應(yīng)完的活性基團(tuán)；【如果抗體量太少，抗體封閉試劑溶液加入量不少于0.5ul】

4）標(biāo)記好的抗體分裝，加入適當(dāng)保護(hù)劑，-20℃保存?zhèn)溆谩?/div>

注意事項

1）本試劑盒中抗體修飾試劑和封閉試劑為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

2）試劑盒組份在運(yùn)輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

3）本試劑盒中活化AP凍干粉需要避光低溫保存，一旦復(fù)溶請一次性使用完；標(biāo)記過程盡量保證其避光；

4）封閉劑需現(xiàn)用現(xiàn)配，干粉溶解后不能長期保存；

5）使用本試劑盒標(biāo)記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環(huán)境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標(biāo)記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失，因此標(biāo)記前準(zhǔn)備抗體時需根據(jù)具體情況考慮最適的抗體量；

6）由于抗體修飾后所帶的基團(tuán)容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的AP進(jìn)行偶聯(lián)；

7）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免酶失活和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會對標(biāo)記效率造成影響。

8）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對皮膚和身體有一定的危害，請全程戴手套操作；DMSO屬微毒類，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用，使用時避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。

Note

For research use only .

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