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  • 產(chǎn)品名稱： 別藻藍(lán)蛋白抗體標(biāo)記試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： ARL0023k-2
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 2800
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 100
  • 規(guī)格： 一盒
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    產(chǎn)品介紹
    別藻藍(lán)蛋白(Allophycocyanin ,APC)是一種從紅藻中提純的高亮度藻膽蛋白，屬于遠(yuǎn)紅色熒光，具有很高的量子產(chǎn)量。激光594 nm和633 nm處激發(fā)其發(fā)光，在650 nm處吸收峰最大，在660 nm處熒光發(fā)射峰最大。APC比普通的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)100倍，在普通應(yīng)用中，其至少可以提高靈敏度5-10倍，主要用于流式細(xì)胞術(shù)、微陣列分析、ELISAs等。APC主要優(yōu)點(diǎn)是發(fā)射長(zhǎng)波熒光，抗淬滅性強(qiáng)，高水溶性，均質(zhì)結(jié)構(gòu)，分子量確定。
    基本原理
    本試劑盒利用抗體和APC上游離的氨基，采用定向?qū)优悸?lián)技術(shù)將抗體分子與APC共價(jià)偶聯(lián)，主要特點(diǎn)：
    1、試劑盒組分齊全，操作簡(jiǎn)單，只要按照操作步驟進(jìn)行便可得到高品質(zhì)APC偶聯(lián)抗體；
    2、本試劑盒所配置的APC為高純度，高活性熒光蛋白，熒光發(fā)光效率更高；
    3、本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù)，熒光蛋白和抗體都不會(huì)發(fā)生自連，保證偶聯(lián)物的特異性和均一性；
    4、試劑盒所使用的交聯(lián)劑增加了延長(zhǎng)臂，確保不會(huì)因?yàn)榈鞍踪|(zhì)位阻而影響發(fā)光效率；
    5、 鑒于APC的蛋白骨架特性，其抗淬滅能力更強(qiáng)。
    試劑盒已經(jīng)提供材料
    APC蛋白 1mg*1支  可用于標(biāo)記0.5mg抗體
    APC蛋白活化試劑 2mg*1支  使用時(shí)加ddH2O 200ul
    標(biāo)記緩沖液 30ml*1瓶
    抗體修飾試劑 2mg*1支 使用時(shí)加ddH2O 1000ul
    30KMWCO超濾管 3支
    封閉試劑 2mg*1支 使用時(shí)加DMSO 200ul
    DMSO溶劑 1ml*1支
    說(shuō)明書(shū) 1份
    其他需要自備試劑材料
    待標(biāo)記的生物分子；
    移液器及吸頭；
    去離子水。
    試劑盒儲(chǔ)存
    試劑盒放在-20?C可保存6個(gè)月以上。
    試劑盒操作流程
    1a.抗體的修飾 與1b.APC的活化兩個(gè)步驟同時(shí)進(jìn)行
    1a.抗體的修飾
    1）抗體修飾試劑溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗體修飾試劑溶液。
    2）取待標(biāo)記抗體（純度>90%），濃度調(diào)整到 5mg/ml以上為宜，按照每毫克抗體加入5μl 抗體修飾試劑溶液，輕輕混勻，在室溫下攪拌反應(yīng) 60-90分鐘。
    3）超濾管內(nèi)芯添加標(biāo)記緩沖液，通過(guò)超濾管多次離心置換溶液，去除多余抗體修飾試劑，超濾管內(nèi)芯收集液為修飾抗體，并調(diào)節(jié)濃度至 3mg/ml。
     
    1b.APC蛋白的活化
    1）取APC蛋白懸液4℃ 12,000rpm 離心 5 分鐘 ,小心吸掉上清，盡量不留殘液；
    2）底部沉淀用標(biāo)記緩沖液重新溶解沉淀，4℃ 12,000rpm 離心 5 分鐘 ,取上清藍(lán)色溶液部分為APC蛋白溶液；
    3）將APC蛋白活化試劑溶解于ddH2O，配制成5mg/ml溶液，按照每毫克APC蛋白加入100ul的比例加入到APC蛋白溶液，室溫避光反應(yīng)2小時(shí)；
    4）反應(yīng)完畢，通過(guò)超濾管離心4次，每次120，00rpm 5min,置換為標(biāo)記緩沖液,以去除游離的APC蛋白活化試劑，濾芯內(nèi)溶液即為活化APC蛋白。
     
    2.活化APC蛋白與抗體偶聯(lián)
    1）活化APC蛋白濃度調(diào)整為5mg/ml；
    2）將修飾抗體與活化APC蛋白，按照質(zhì)量比1:2比例（每毫克修飾抗體對(duì)應(yīng)2毫克活化APC蛋白）混合，室溫避光反應(yīng)2小時(shí)；
    3）將封閉試劑管中加入200ul DMSO,配置成10mg/ml封閉試劑溶液；按照每毫克抗體3.4ul的體積加入步驟2）反應(yīng)產(chǎn)物中，封閉未反應(yīng)完的活性基團(tuán)；
    4）標(biāo)記好的抗體分裝，4℃保存?zhèn)溆?，或加入適當(dāng)保護(hù)劑，-20℃保存?zhèn)溆谩?/div>
    注意事項(xiàng)
    1）本試劑盒中抗體修飾試劑為高活性試劑，請(qǐng)-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。
    2）試劑盒組份在運(yùn)輸過(guò)程中可能造成顛倒，會(huì)使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請(qǐng)離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。
    3）本試劑盒中APC蛋白需要避光低溫保存，標(biāo)記過(guò)程盡量保證其避光；
    4）封閉劑需現(xiàn)用現(xiàn)配，干粉溶解后不能長(zhǎng)期保存；
    5）使用本試劑盒標(biāo)記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環(huán)境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標(biāo)記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測(cè)定等操作都會(huì)造成抗體量的損失，因此標(biāo)記前準(zhǔn)備抗體時(shí)需根據(jù)具體情況考慮最適的抗體量；
    6）由于抗體修飾后所帶的基團(tuán)容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的APC進(jìn)行偶聯(lián)；
    7）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免熒光淬滅和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會(huì)對(duì)標(biāo)記效率造成影響。
    8）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對(duì)皮膚和身體有一定的危害，請(qǐng)全程戴手套操作；DMSO屬微毒類，對(duì)人體皮膚有滲透性，對(duì)眼有刺激作用，使用時(shí)避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。
    Note
    For research use only .