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- 產品名稱： SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
- 產品貨號： CSK00012
- 貨期： 現貨
- 價格與訂購： 2880
- 數量：
庫存： 100
- 規(guī)格：
- 產品信息
- 如何訂購
產品名稱（Product Name）
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) S-RBD ELISA Kit
貨號（Catalog#）
CSK00012
產品描述（Description）
本試劑盒采用雙抗夾心ELISA定量分析技術，將抗RBD蛋白單克隆抗體預先包被在酶標板上，之后將標準品或分析樣本加入到微孔中，樣本中RBD蛋白會被預包被的抗體捕獲，清洗掉未結合的物質后，將生物素標記的抗RBD蛋白單克隆抗體加入到微孔中反應，形成夾心復合物，再加入HRP標記的鏈霉親和素，清洗掉未結合的抗體及酶試劑之后，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強度與樣品中RBD蛋白濃度成正比。
本試劑盒用于測定支氣管肺泡灌洗液、鼻咽拭子樣本中RBD蛋白的濃度。
穩(wěn)定性&儲存（Stability &Storage）
收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B 以及預包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
運輸方式（Shipping）
藍冰運輸
使用方法（Standard Operating Procedure）
所需設備及試劑
?450 nm濾光片酶標儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
?單道或多道微量移液器，移液器槍頭
?去離子水
? 500 mL量筒
?樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
?吸水紙
一、試劑準備
使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
20×濃縮清洗液： 如果濃縮液中有晶體析出，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
標準品：用1mL樣本稀釋液溶解RBD蛋白標準品凍干粉，溶解后標準品母液濃度為8000pg/mL。震蕩混勻后靜置10分鐘，然后進行標準品的稀釋，將標準品母液使用樣本稀釋液10倍稀釋得到第一個標準點800pg/mL，依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標準點800 pg/mL、 400 pg/mL、200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、最后再以100ul樣本稀釋液為零標準（0 pg/mL），共計8個標準點，建議每個標準點至少做2個平行孔。
檢測溶液A（生物素標記）：震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
檢測溶液B（HRP標記）：震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，臨用前取合適體積用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
顯色液: 避光保存，顯色時100μL /孔。
終止液：顯色完畢后50μL /孔。
二、實驗步驟
使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對所有標準品和樣本進行一式兩份的分析
1. 按照前面章節(jié)的指示準備所有試劑和準備工作。
2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入100μL 稀釋好的標準品（共計8點）和待測樣本，用封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
4. 棄去孔內液體，每孔加入 300μL的清洗工作液，輕微震蕩后棄去孔內液體，將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內的液體全部去除，重復洗板3次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動洗板機來完成。
5. 每孔加入100μL檢測溶液A工作液（生物素標記），用新的封板膜封住，37℃孵育60分鐘。
6. 重復步驟4中的洗板程序。
7. 每孔加入100μL檢測溶液B工作液（HRP標記），用新的封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
8. 重復步驟4中的洗板程序。
9. 每孔加入100μL顯色液，室溫避光顯色10分鐘。
10. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應該由藍色變至黃色，如果孔內顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動酶標板板使顏色均一。
11. 擦干酶標板底部水氣，立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度值（O.D.值），如果波長校正可用，則設置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數中減去540 nm或570 nm的讀數，這種修正可去除酶標板讀數中的光學偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm的讀數，但讀值有可能會更高、更不準確。
三、標準曲線制作
取每個標準品和樣本的復孔平均值O.D.，減去零標準孔平均值O.D.后，以陽性對照的濃度為橫坐標，O.D.值為縱坐標，繪出標準曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將樣本的平均值O.D.帶入標準曲線的回歸方程式，計算出樣本中目標蛋白濃度。
如果樣本已經稀釋，從標準曲線上算出的濃度須乘以稀釋系數，即為樣本中目標蛋白的實際濃度。
四、標曲案例
標準曲線僅用于演示，每次實驗均需生成單獨的標準曲線。
五、檢測范圍
12.5pg/mL—800pg/mL
六、最低檢測限(MDD)
10pg/mL
MDD是測試20個零標準（稀釋液）的平均O.D.值上加兩倍標準差后計算相應的濃度來確定的。
七、精密度
批內差： CV<12%
批間差： CV<15%
八、穩(wěn)定性
試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
九、實驗細節(jié)說明
1. 在試劑盒標簽上的有效期內使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
2. 如果樣本檢測值超出標準曲線范圍，可適當調整稀釋倍數并重新測定，或預估樣本中蛋白濃度，在實驗之前預先稀釋數個梯度同時進行測定。
3. 為避免交叉污染，不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。
4. 在孵育過程中貼緊封板膜。
5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出在室溫平衡。
6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。
7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應，如情節(jié)嚴重請及時就醫(yī)。
8. 試劑盒酶標板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內使用，未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存，收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B、以及預包板保存于-20℃，其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
十、常見問題解決指南
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
| 標準曲線差 | 移液不精確 | 檢查和校正移液器 |
| 標準品準備不正確 | 進行正確的標準品梯度稀釋 | |
|
O.D 值低 | 孵育時間太短 | 保證充足的孵育時間 |
| 溫度不正確 | 試劑平衡至室溫并保證孵育溫度正確 | |
| 試劑體積不正確 | 檢查移液器并確保加樣體積與說明書一致 | |
|
精密度低 | 移液不精確 | 檢查和校正移液器 |
| 混勻不充分 | 充分混勻和吸取試劑 | |
| 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 | |
| 背景值高 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
| 清洗液污染 | 重新配置清洗液 | |
| 靈敏度低 | 試劑盒儲存不當 | 試劑盒短期整體保存于4℃，長期保存根據說明書分開保存各組分 |
組分和說明（Component and Instruction）
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