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  • 產(chǎn)品名稱： SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： CSK00019
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 2880
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 100
  • 規(guī)格：
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    產(chǎn)品名稱（Product Name）
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)
    貨號(hào)（Catalog#）
    CSK00019
    產(chǎn)品描述（Description）
    SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit(E484K,K417T,N501Y)基于中和抗體ELISA檢測(cè)的原理，可以檢測(cè)血清或血漿中抗SARS-CoV-2病毒的中和抗體濃度，這種抗體可以阻斷RBD(E484K,K417T,N501Y)和ACE2之間的相互作用，該試劑盒包含兩個(gè)關(guān)鍵成分：HRP標(biāo)記的重組人ACE2蛋白和SARS-CoV-2病毒RBD(E484K,K417T,N501Y)蛋白。
    本試劑盒用于測(cè)定血清或血漿樣本 RBD(E484K,K417T,N501Y)中和抗體的濃度。
    穩(wěn)定性&儲(chǔ)存（Stability &Storage）
    收到試劑盒后請(qǐng)將陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、檢測(cè)溶液 A 以及預(yù)包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請(qǐng)置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/div>
    試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
    運(yùn)輸方式（Shipping）
    藍(lán)冰運(yùn)輸
    使用方法（Standard Operating Procedure）
    所需設(shè)備及試劑
    450 nm濾光片酶標(biāo)儀，含540 nm或570nm校正波長(zhǎng)更佳
    單道或多道微量移液器，移液器槍頭
    去離子水
    500 mL量筒
    樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
    吸水紙
     
    一、樣品收集與儲(chǔ)存
    處理所有的血液和血清，請(qǐng)按照NCCLS提供的處理和儲(chǔ)存血清和血漿樣本的建議（1990年H18-A批準(zhǔn)的血液樣本處理和處理標(biāo)準(zhǔn)程序）。
    血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過(guò)夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測(cè)，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
    血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分鐘，取上清檢測(cè)，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復(fù)凍融。
     
    二、試劑準(zhǔn)備
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
    20×濃縮清洗液：如果濃縮清洗液中有晶體析出，平衡至室溫并搖勻，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗液。
    待測(cè)樣本：將待測(cè)樣本用樣本稀釋液按照體積比1:9稀釋，例如10μL樣本加入90μL樣本稀釋液。
    陽(yáng)性對(duì)照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:100稀釋至工作濃度。
    陰性對(duì)照：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:10稀釋至工作濃度。
    檢測(cè)溶液A（HRP標(biāo)記）：臨用前震蕩混勻后用掌上離心機(jī)瞬時(shí)離心，使液體集中于管底，使用檢測(cè)溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
    顯色液：避光保存，顯色時(shí)100μL /孔。室溫下孵育8?10分鐘。
    終止液：顯色完畢后50μL /孔。
     
    三、實(shí)驗(yàn)步驟
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本進(jìn)行一式兩份的分析。
    1. 按照前面章節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑和樣本。
    2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
    3. 將稀釋的陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和待測(cè)樣本分別與檢測(cè)溶液A按照 1:1等體積混合。例如，將100μL陽(yáng)性對(duì)照與100μL檢測(cè)溶液A混合，該步驟可在96孔PCR板或者96孔Elisa板中進(jìn)行。
    4. 將陽(yáng)性對(duì)照混合物、陰性對(duì)照混合物和待測(cè)樣本混合物各100μL添加到對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)板孔中，用封板膜蓋好，37℃孵育1小時(shí)。
    5. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗液，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標(biāo)板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復(fù)洗板 5 次，此過(guò)程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)完成。
    6. 每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色8-10分鐘。
    7. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應(yīng)該由藍(lán)色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板使顏色均一。
    8. 擦干酶標(biāo)板底部水氣，立刻用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的O.D.值，如果波長(zhǎng)校正可用，則設(shè)置為540 nm或570 nm，如果波長(zhǎng)校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標(biāo)板讀數(shù)中的光學(xué)偏差，如果沒(méi)有校正波長(zhǎng)，可直接讀取450 nm的讀數(shù)，但讀值有可能不準(zhǔn)確。
     
    四、結(jié)果判讀
    為確保結(jié)果的有效性，每次檢測(cè)必須包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照檢測(cè)OD450必須在下表所列的范圍內(nèi)，如果OD450值不符合下表要求，則試驗(yàn)無(wú)效，必須重復(fù)進(jìn)行。

    項(xiàng)目

    OD450值

    結(jié)果判斷

    陽(yáng)性對(duì)照

    ＜ 0.3

    通過(guò)

    陰性對(duì)照

    ＞0.9

    通過(guò)

    用抑制率來(lái)判定樣本中抗SARS-CoV-2中和抗體的水平，判定公式如下：

     

    五、判定閾值

    項(xiàng)目

    閾值

    結(jié)果

    檢測(cè)結(jié)果判讀

           中和抗體檢測(cè)

    ≥20%

    陽(yáng)性

    檢測(cè)到中和抗體

    ＜20%

    陰性

    未檢測(cè)到中和抗體

     
     
    六、精密度
    批內(nèi)差：CV<8%
    批間差：CV<10%
     
    七、穩(wěn)定性
    試劑盒按推薦溫度保存6個(gè)月，信號(hào)強(qiáng)度降低小于 10%。
     
    八、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)說(shuō)明
    1. 在試劑盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。
    2. 如果陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)OD值超出檢測(cè)范圍，可適當(dāng)縮短顯色時(shí)間。
    3. 為避免交叉污染，不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨(dú)的容器儲(chǔ)存。
    4. 在孵育過(guò)程中貼緊封板膜。
    5. 顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出室溫平衡。
    6. 濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實(shí)驗(yàn)人員自備。
    7. 終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時(shí)避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應(yīng)，如情節(jié)嚴(yán)重請(qǐng)及時(shí)就醫(yī)。
    8. 試劑盒酶標(biāo)板條可按需拆卸使用，已開(kāi)封的試劑盒建議在1個(gè)月內(nèi)使用，未開(kāi)封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存，收到試劑盒后請(qǐng)將陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、檢測(cè)溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余試劑請(qǐng)置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

     

    九、常見(jiàn)問(wèn)題解決指南

    問(wèn)題

    可能原因

    解決方案

    陽(yáng)性質(zhì)控讀數(shù)低或者異常

    檢測(cè)溶液A和預(yù)包板失活

    a.

    增加反應(yīng)時(shí)間或檢測(cè)試劑濃度以補(bǔ)償可能喪失的活性

    儀器設(shè)置錯(cuò)誤

    a.

    a.

     

    檢查儀器設(shè)置

    b.

    提前一小時(shí)預(yù)熱酶標(biāo)儀

    加樣錯(cuò)誤

    a.

    檢查加樣步驟

    試劑過(guò)早提前準(zhǔn)備

    a.

    確保工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

    溫度不穩(wěn)定

     

    a.

    孵育時(shí)間和溫度參見(jiàn)說(shuō)明書，避免反復(fù)凍融

     

    讀數(shù)背景高

    樣品中含有抑制劑

     

    a.

    加入空白孔

    b.

    保證DMSO < 1%

    洗滌不完全

    a.

    增加洗滌次數(shù)和洗液量

    緩沖液樣品污染、降解

     

    a.

    確保正確準(zhǔn)備，使用和存儲(chǔ)了緩沖液和樣品

     

    讀數(shù)不穩(wěn)定

    移液或稀釋方法不一致

    a.

    校正移液器

     

    b.

     

    準(zhǔn)備預(yù)混液以減少移液不一致

    c.

    設(shè)置平行孔以獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果

    孔中有氣泡

    a.

    輕震酶標(biāo)板以去除氣泡

     

    讀數(shù)過(guò)高

    a.

    調(diào)整樣品濃度以達(dá)到最佳信號(hào)強(qiáng)度。

     

    b.

    孵育時(shí)間調(diào)整至45分鐘

     

    試劑和樣品混合不充分

    a.

    確保試劑與樣品完全混合

     

    顯色不完全

    緩沖液殘留或污染

     

    a.

    陰性對(duì)照中的顏色應(yīng)在添加TMB底物后10秒鐘內(nèi)出現(xiàn)。

    如未按上述時(shí)間顯色可考慮以下情況：

    a.在添加TMB之前確保沒(méi)有污染或殘留的緩沖液

    b.延長(zhǎng)TMB孵育時(shí)間到15分鐘

     
    組分和說(shuō)明（Component and Instruction）

    icon
    Note
    For research use only .