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一 、熱激轉化法

1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細胞轉移到-20℃過夜預冷的搖菌管中，加入 質粒或連接產物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。

2. 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過程不要搖動搖菌管。

3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉化效率），37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。

4. 根據實驗要求（質粒，重組連接產物轉化），吸取不同體積已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

二、10分鐘快速轉化法

注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時，需要在SOC培養(yǎng)基中復蘇以提高轉化效率，當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時，該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基，在37℃ 180rpm孵育1小時，然后轉移到37℃預熱的LB培養(yǎng)基上。

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預熱。

2. Top10感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置5分鐘。

3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。