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噬菌體展示--羊駝免疫納米抗體文庫(kù)定制

抗體藥物研發(fā)服務(wù)平臺(tái)--羊駝免疫納米抗體文庫(kù)定制

一、服務(wù)簡(jiǎn)介

  納米抗體(nanobody,Nb),即重鏈單域抗體VHH(variable domain of heavy chain of heavy

chainantibody),該類(lèi)抗體只包含一個(gè)重鏈可變區(qū)(VHH)CH2,CH3區(qū),相比于其他抗體,輕鏈天然缺失。納米抗體晶體直徑2.5nm,長(zhǎng)4m,是自然存在的可以和抗原結(jié)合的最小片段。

 

二、納米抗體的應(yīng)用

  納米抗體能用于構(gòu)建多重不同類(lèi)型的分子結(jié)構(gòu),在醫(yī)學(xué)診斷和治療上實(shí)用性較高。例如可以構(gòu)建成雙功能抗體或雙特異性抗體進(jìn)行疾病的靶向治療。通過(guò)基因改造,納米抗體可以形成多聚體,大大提高了抗體與抗原的結(jié)合能力。通過(guò)基因工程形成納米抗體融合蛋白可以帶上酶或者毒素,融合蛋白在組織穿透,清除速度及穩(wěn)定性上比普通抗體更有優(yōu)勢(shì),可以用于低濃度抗原的檢測(cè)。

 

三、科斯坦生物的優(yōu)勢(shì)

針對(duì)特定靶點(diǎn)的納米抗體定制服務(wù)

科斯坦可以提供針對(duì)特定靶點(diǎn)的特異性納米抗體定制服務(wù),包括抗原檢測(cè),羊駝免疫,采血,效價(jià)檢測(cè),納米抗體噬菌體庫(kù)構(gòu)建及淘選,特異性高親和力納米抗體篩選,表達(dá),檢測(cè)一條龍服務(wù)。親和力可以達(dá)到10-8~10-10M級(jí)別。

 

四、案例展示

針對(duì)靶點(diǎn)B的特異性納米抗體定制服務(wù):

1. 靶點(diǎn)B免疫羊駝,進(jìn)行四輪免疫后采血提取PBMC,經(jīng)RNA提取,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后擴(kuò)增獲取VHH可變區(qū)片段

 

2.免疫羊駝納米抗體庫(kù)的構(gòu)建:

將獲得的VHH可變區(qū)片段連入噬菌體展示載體,電轉(zhuǎn)宿主菌,最終獲得庫(kù)容為8.76*10^9納米抗體庫(kù),插入正確率為100%

 

3.免疫羊駝納米抗體庫(kù)的淘選及篩選:

利用構(gòu)建的免疫羊駝納米抗體庫(kù),針對(duì)靶點(diǎn)B蛋白,完成三輪淘選,其淘選富集度如下:

 

篩選96個(gè)克隆,其中陽(yáng)性克隆共94個(gè),陽(yáng)性率為97.9

 

排除重復(fù)序列,最終獲得了7條不同的抗體序列。將這些抗體序列表達(dá)成可溶性的VHH抗體蛋白,進(jìn)行再次驗(yàn)證,結(jié)果如下:

 

隨機(jī)挑選兩條抗體蛋白進(jìn)行親和力測(cè)定,結(jié)果如下:

R1P1-A10:KD:6.49E-09M

R1P1-H12:KD:1.52E-07M

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